Sephadex G-25 medium 葡聚糖凝胶G-25

 
Sephadex G-25 medium 葡聚糖凝胶G-25使用说明
 
化学和物理性质
葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶
液中溶胀。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分
离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影
响。
葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要分辨率的柱
色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获
得较高的流速。另外，粗级也可用于批量工艺。
化学稳定性
葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂（除非它被化学降解）。它在水、盐溶液、有机
溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。
物理稳定性
葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性 PH 进行灭菌或在高压灭菌器 120
℃、 30 分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。
葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。 
产品说明：
产  品  名  称  分  离  范  围  应   用
葡聚糖凝胶 G-10  <700  缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子
葡聚糖凝胶 G-15  <1500  缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子
葡聚糖凝胶 G-25  1000-5000  工业上脱盐及交换缓冲液
葡聚糖凝胶 G-50  1000-30000  多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定
葡聚糖凝胶 G-75  2000-70000  蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶 G-100  2000-120000  蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶 G-150  5000-300000  蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
葡聚糖凝胶 G-200  5000-600000  蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定

使用方法：
1. 乙醇浸泡：
  在室温下，将干粉浸泡于 50-60%乙醇中至少 24 小时，并不断搅拌以保证凝胶
溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2. 无盐水浸泡：
  室温下，在无盐水中充分溶胀 24 小时，间隙搅拌，以保证凝胶的*溶胀，
然后；
3. 盐酸浸泡：
  在常温下再用 0.2N HCl 浸泡 12 小时，间隙搅拌，滤干，水洗只中性；
4. 将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，
注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层；
5.  上样前平衡层析柱至少 3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的
PH值等于上柱的 Buffer 的 PH值）；
6.  凝胶过滤的上样量一般为 5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在 1-2%的
床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在 40-50cm  以下，过高的凝胶层会引起较大
的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比
为 5：1 即可；
7.  洗脱方法：
    可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱 Buffer 中加入 NaCl
等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化；
8.  在位清洗（CIP）
    凝胶使用十次后作一次 CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。
方法是以 40cm/h 用 1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡
缓冲液再生。
 
备注: 其它规格葡聚糖凝胶处理方法类似。

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